Fluorescencinio rezonanso energijos perdavimas (FRET)
Fluorescencinis rezonansinis energijos perdavimas (FRET) – tai neradiacinis energijos perdavimo procesas, kurio metu donoro sužadintos būsenos energija perduodama į akceptoriaus sužadintą būseną, sąveikaujant tarpmolekulinėms elektrinėms poroms.Šiame procese nedalyvauja fotonai, todėl jis nėra spinduliuojantis.Šio tyrimo pranašumai yra greiti, jautrūs ir nesudėtingi.
FRET tyrime naudojami dažai gali būti identiški.Tačiau daugeliu atvejų iš tikrųjų naudojami skirtingi dažai.Trumpai tariant, šviesos rezonanso energijos perdavimas yra dipolių poros perkėlimas iš donoro (dažiklis 1) į akceptorių (dažiklis 2), kai donorų grupė yra sužadinta.Apskritai donoro fluoroforų grupės emisijos spektras sutampa su akceptorių grupės sugerties spektru.„Kai atstumas tarp dviejų fluoroforų yra tinkamas (10–100 A), galima stebėti fluoroforo energijos perdavimą iš donoro į akceptorių.Energijos perdavimo būdas priklauso nuo receptoriaus cheminės struktūros:
1. Paverčiamas molekuline vibracija, tai yra, šviečianti energijos perdavimo šviesa išnyksta.(Receptorius yra šviesos gesintuvas)
2. Spinduliuotė yra intensyvesnė nei pats receptorius, todėl antriniame fluorescencijos spektre atsiranda raudonasis poslinkis.(Receptoriai yra šviesos skleidėjai).
Donorų grupė (EDANS) ir akceptoriaus genas (DABCYL) yra vienodai susieti su natūraliu ŽIV proteazės substratu, o kai substratas nėra atjungtas, DABCYL gali užgesinti EDANS ir tada tapti neaptinkamas fluorui.Atjungus ŽIV-1 proteazę, EDANS nebegesina DABCYL, o vėliau galima aptikti EDANS luciferazes.Proteazės inhibitorių prieinamumą galima stebėti keičiantis EDANS fluorescencijos intensyvumui.
FRET peptidai yra patogios priemonės peptidazės nespecifiškumui tirti.Kadangi jo reakcijos procesą galima nuolat stebėti, tai yra patogus fermento aktyvumo nustatymo metodas.Blizgesys, atsirandantis po donoro / akceptoriaus hidrolizės peptidinėms jungtims, yra fermento aktyvumo matas esant nanomolinėms koncentracijoms.Kai FRET peptidas yra nepažeistas, jis rodo staigų vidinio blyksnio išnykimą, bet kai nutrūksta bet kokia peptidinė jungtis, esanti priešais donorą / akceptorių, ji išskiria blyksnį, kurį galima nuolat aptikti ir tada kiekybiškai įvertinti fermento aktyvumą.
Paskelbimo laikas: 2023-08-14