Biologiniuose tyrimuose dažniausiai naudojami ilgos sekos polipeptidai.Peptidams, kurių sekoje yra daugiau nei 60 aminorūgščių, jiems gauti paprastai naudojama genų ekspresija ir SDS-PAGE.Tačiau šis metodas trunka ilgai, o galutinis produkto atskyrimo efektas nėra geras.
Ilgos peptidų sintezės iššūkiai ir sprendimai
Ilgų peptidų sintezėje visada susiduriame su problema, tai yra, didėjant sintezės sekai, didėja kondensacijos reakcijos sterinis trukdis, o reakcijos laiką reikia koreguoti, kad reakcija būtų baigta.Tačiau kuo ilgesnis reakcijos laikas, tuo daugiau atsiranda šalutinių poveikių ir susidaro dalis tikslinio peptido.Tokios liekanos – deficitinės peptidinės grandinės yra pagrindinės priemaišos, susidarančios ilgos peptidų sintezės metu.Todėl ilgo peptido sintezėje pagrindinė problema, kurią turime įveikti, yra ištirti aukštos kokybės reakcijos sąlygas ir reakcijos metodus, kad aminorūgščių kondensacijos reakcija būtų išsamesnė ir išsamesnė.Be to, sumažinkite reakcijos laiką, nes kuo ilgesnis reakcijos laikas, tuo daugiau nekontroliuojamų šalutinių reakcijų, tuo sudėtingesni šalutiniai produktai.Todėl apibendrinami šie trys punktai:
Mikrobangų sintezė gali būti naudojama: Kai kurioms sintezės procese aptinkamoms aminorūgštims, kurias nėra lengva integruoti, galima naudoti mikrobangų sintezę.Šis metodas duoda puikių rezultatų ir labai sumažina reakcijos laiką bei sumažina dviejų pagrindinių šalutinių produktų susidarymą.
Galima naudoti fragmentų sintezės metodą: Kai kai kuriuos peptidus sunku susintetinti įprastais sintezės metodais ir nelengva išvalyti, galime pritaikyti visą kelių aminorūgščių kondensaciją tam tikrame peptido segmente į peptidų grandinę kaip visumą.Šis metodas taip pat gali išspręsti daugelį sintezės problemų.
Galima naudoti acilhidrazido sintezę: peptidų acilhidrazido sintezė yra N-galo Cys peptido ir C-galo polipeptido hidrazido kietosios fazės sintezės metodas, vykstanti cheminės selektyvios reakcijos tarp amido jungčių susidarymo, siekiant peptidinio sujungimo metodo.Remiantis Cys padėtimi peptidinėje grandinėje, šis metodas padalija visą peptidinę grandinę į kelias sekas ir atitinkamai jas sintetina.Galiausiai tikslinis peptidas gaunamas per skystos fazės kondensacijos reakciją.Šis metodas ne tik labai sumažina ilgo peptido sintezės laiką, bet ir žymiai padidina galutinio produkto grynumą.
Ilgas peptidų valymas
Ilgų peptidų ypatumai neišvengiamai lemia sudėtingus neapdorotų peptidų komponentus.Todėl taip pat yra iššūkis išvalyti ilgus peptidus naudojant HPLC.amiloido serijos polipeptidų gryninimo procesas, sugeriantis daug patirties ir sėkmingai naudojamas ilgų peptidų gryninimui.Pritaikius naują įrangą, sumaišius kelias valymo sistemas, pakartotinį atskyrimą ir kitus patirties metodus, ilgo peptidinio valymo sėkmės rodiklis buvo labai pagerintas.
Paskelbimo laikas: 2023-04-18