Rekombinantiniai baltymo antigenai dažnai turi kelis skirtingus epitopus, kai kurie iš jų yra sekos epitopai, o kiti – struktūriniai epitopai.Polikloniniai antikūnai, gauti imunizuojant gyvūnus denatūruotais antigenais, yra antikūnų, būdingų atskiriems epitopams, mišiniai ir gali būti naudojami aptikti natūralias struktūras arba denatūruotus tikslinius baltymus.Šalutinis denatūruotų baltymų, kaip imunogenų, naudojimo pranašumas yra tas, kad denatūruoti baltymai yra labiau imunogeniški ir gali paskatinti stiprų gyvūnų imuninį atsaką.
Escherichia coli ekspresijos sistema dažniausiai pasirenkama antigeniniais tikslais, nes tai yra pati brangiausia sistema laiko ir pinigų požiūriu.Siekiant pagerinti tikslinio baltymo ekspresijos galimybę ir gryninimo patogumą, kartais išreiškiamas tik mažas tikslinio baltymo fragmentas, pavyzdžiui, specifinis domenas.
Baltymų trimatė struktūra
Specifinis baltymo domenas
Jei antikūnų paruošimo tikslas yra tik kūno aptikimui, ekonomiška ir greita naudoti sintetinį mažą peptidą kaip antigeną, tačiau dėl netinkamo peptido segmento parinkimo kyla silpno imunogeniškumo arba neregeniškumo rizika.Kadangi antikūnų paruošimas reikalauja ilgo laikotarpio, dažnai parenkami du ar trys skirtingi peptidų segmentai, norint paruošti antikūnus naudojant polipeptidinį antigeną, kad būtų užtikrintas eksperimento sėkmės rodiklis.
Polipeptidinio antigeno grynumas imunizacijai turi būti didesnis nei 80%.Nors teoriškai naudojant didesnį grynumą galima gauti geresnio specifiškumo antikūnus, praktiškai gyvūnai visada gamina daug nespecifinių antikūnų, taip užmaskuodami antigeno grynumo naudą.
Be to, antikūnų paruošimas iš mažų peptidų turi būti susietas su atitinkamu nešiklio antigenu, kad būtų sustiprintas jo imunogeniškumas.Du įprasti antigeniniai nešikliai yra KLH ir BSA.
Paskelbimo laikas: 2023-03-23